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产品详细介绍:
本品为iFluor 555标记的鬼笔环肽,可发出橘红色的荧光,具有的高亮度和光稳定性,且染色反应特异性强,对比性高,具有比Actin抗体更好的染色效果,适合用作F-actin的定性和定量检测。iFluor 555 鬼笔环肽染色与用于细胞分析的其他荧光染色*兼容,包括荧光蛋白、纳米晶体和其他iFluor偶联物(包含iFluor偶联二抗)。另外,经本品结合后的F-actin仍能维持actin自身具有的许多生物学特性。且本品的结合没有物种差异性,适用性广泛。本品以1000×储存液形式(溶于DMSO)提供。 鬼笔环肽(Phalloidin)是一种来源于毒蕈类鬼笔鹅膏(Amanita phalloides)的环状七肽毒素,以高亲和力(Kd= 20 nM)选择性结合于丝状肌动蛋白F-actin,而不会与单体肌动蛋白G-actin结合,通常用来标记组织切片、细胞培养物或无细胞体系中的F-actin,从而对F-actin进行定性和定量分析。另外,鬼笔环肽衍生物也以相近的亲和力结合于大小纤维,无论是动植物来源的肌肉细胞或非肌肉细胞,按照每一个肌动蛋白亚基约与一个鬼笔环肽分子的计量比结合。且非特异性结合几乎可忽略,染色区域和非染色区域辨识度非常明显。因此,鬼笔环肽衍生物特别适合替代肌动蛋白(Actin)抗体进行相关研究。另外鬼笔环肽衍生物很小,直径约12-15?,分子量<2000 Daltons,未标记肌动蛋白(Actin)的许多生理特性都得以维持,比如,同肌动蛋白结合蛋白如肌球蛋白,原肌球蛋白,DNase I等仍能发生反应;鬼笔环肽标记的纤维丝仍可穿透固相肌球蛋白基质;以及甘油抽提的肌纤维标记后仍可收缩等。 鬼笔环肽(Phalloidin)的结合阻止丝状肌动蛋白(微丝)的解离,稳定微丝结构,从而破坏微丝的聚合-去聚合的动态平衡。此特性使得肌动蛋白聚合发生的临界浓度(CC)降至<1μg/mL,因此,可用作一种聚合促进剂。此外,鬼笔环肽还可抑制F-actin的ATP水解活性。 分子量:~1300 大激发/发射波长:556/574nm 溶解性:溶于DMSO 储存条件:-20℃避光干燥,有效期一年 |
下列是产品的订购信息!产品仅用于科研
中文名称 | 英文名称 | 产品规格 | 货号 |
iFluor 555 phalloidin | 300T | GOY-F10203 |
DNA提取流程图:
实验步骤
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊(25:24:1)抽提两次,:异戊(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
酸性成纤维生长因子 英文名称: acid fibroblast growth factor 规格: 48T/96T 英文缩写: a-FGF 4,4'-Bis(diethylamino)benzophenone 90-93-7 中文名:四乙基米氏酮 分子式:C21H28N2O 度:98.0%
酸性0酸酶(ACP)检测 Prostate acid enzyme (PACP) detection Polypodine B 18069-14-2 中文名:水龙骨甾酮B 分子式:C27H44O8 度:97.5% 关键词: 昆虫蜕皮激素活性; 欧亚水龙骨; 蜕化类固; 中药对照品; 中药标准品; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库
酸性0酸酶(ACP)测定试剂盒(微板法) Repaglinide ethyl ester 中文名: 分子式:C29H40N2O4
酸性0酸酶(ACP)测定试剂盒(微板法) Repaglinide 中文名: 分子式:Repaglinide
素 英文名称: Human Renin 规格: 48T/96T 英文缩写: RN 4,4'-Bis(5-methyl-2-benzoxazolyl)stilbene 2397-00-4 中文名:4,4'-双(5-甲基-2-苯并恶唑基)芪 分子式:C30H22N2O2 度:98.0% 关键词:
DL-赖 DL-Lysine 质量规格:>98%,BR ratProstaglandinE1,PG-E1ELISAKit大鼠前列E1(PGE1)ELISA试剂盒规格:96T/48T
DL-精盐酸盐 DL-Arginine 质量规格:>98%,BR HelicobacterpyloriRFLP基因分析试剂盒20
左旋肉碱;BT;左卡尼汀 L(-)-Carnitine 质量规格:>98%,BR MouseTumornecrosisfactorsolublereceptorⅠ,TNFsR-ⅠELISA试剂盒小鼠肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)ELISA试剂盒规格:96T/48T
左卡尼汀;左旋肉碱(标准品) Levocarnitine;L(-)-Carnitine 质量规格:HPLC含量测定 小鼠抗单链DNA抗体/变性DNA抗体(ssDNA)ELISA试剂盒 ,英文名: ssDNA ELISA Kit
L-谷钠,一水 L-Glutamic acid mono salt hydrate 质量规格:>99% 大鼠降钙素基因相关肽(CGRP)ELISA检测试剂盒Ratcalcitoningenerelatedpeptide,CGRPELISAKit 96T/48T
L-(标准品) L-Glutamine 质量规格:HPLC≥98%,标准品 人单疱疹病毒Ⅰ+Ⅱ型(HSVⅠ+Ⅱ)抗体(IgM)试剂盒 Human herpes simplexvirus Ⅰ+Ⅱ(HSVⅠ+Ⅱ)aibody(IgM)ELISA kit
(还原型) Glutathione (Reduced);GSH 质量规格:>98%,BR RatProstaglandinE2,PG-E2ELISAKit大鼠前列E2(PGE2)ELISA试剂盒规格:96T/48T
L-(标准品) Glutathione (Reduced) 质量规格:HPLC>98%,标准品,还原型 Helly固着液50毫升
(氧化型) Glutathione(Oxidized) 质量规格:度大于98%,BR MouseTumornecrosisfactorsolublereceptorⅡ,TNFsR-ⅡELISA试剂盒小鼠肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅱ(TNFsR-Ⅱ)ELISA试剂盒规格:96T/48T
DL-异亮 DL-Isoleucine 质量规格:>99%,BR 小鼠抗单核细胞抗体(AMA)ELISA试剂盒 ,英文名: AMA ELISA Kit
iFluor 555标记鬼笔环肽(橘色)细胞基质金属(MMP-9)明胶法比色定量检测试剂盒
体液基质金属(MMP-2)明胶法比色定量检测试剂盒
组织基质金属(MMP-2)明胶法比色定量检测试剂盒
细胞基质金属(MMP-2)明胶法比色定量检测试剂盒
基质金属抑制剂(TIMP1/2/3)逆相明胶酶谱法(reverse gelatin-zymography)电泳分析试剂盒(不含标准样)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物*分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。