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产品详细介绍:
钙黄绿素Calcein-AM是一种对活细胞进行荧光标记的细胞染色试剂,发绿色荧光(Ex=490 nm,Em=515 nm)。 因其在传统的Calcein(钙黄绿素)基础上引入乙酰甲氧基甲酯(AM)基团,增加了疏水性,使其能够轻易穿透活细胞膜。一旦进入细胞后,Calcein-AM(本身不发荧光)被细胞内的酯酶剪切形成膜非渗透性的极性分子Calcein,从而被滞留在细胞内并发出强绿色荧光。与其它同类试剂(如BCECF-AM和CFDA)相比,由于Calcein, AM细胞毒性极低,是适合用于活细胞染色的荧光探针,而且不会抑制任何的细胞功能,如增殖和淋巴球的趋化性。 由于死细胞缺乏酯酶,Calcein, AM仅用于对活细胞的细胞生存能力测试和短期标记。作为核染色染料的碘化丙啶不能穿过活细胞的细胞膜,它穿过死细胞膜的无序区域而到达细胞核,并嵌入细胞的DNA双螺旋从而产生红色荧光(激发:535 nm,发射:617 nm),因此PI仅对死细胞染色。由于Calcein和PI-DNA都可被490 nm激发,因此可用荧光显微镜同时观察活细胞和死细胞。而用545 nm激发,仅可观察到死细胞。根据以上特点,Calcein, AM和PI经常被结合用来作为活细胞和死细胞的双重染色。由于不同细胞系的佳染色条件不同,我们建议个别确定 Calcein, AM 和 PI的合适浓度。 本品为粉末形式提供的Calcein-AM,纯级别(≥95%),可与碘化丙啶(PI)(SY0491)联合使用,用于活细胞和死细胞的同时检测。或者直接购买我司提供的Calcein-AM/PI活细胞/死细胞双染试剂盒(SY0501)。 |
下列是产品的订购信息!产品仅用于科研
中文名称 | 英文名称 | 产品规格 | 货号 |
Calcein, AM, Ultrapure Grade | 50μg|2×50μg|20×50μg|1mg | GOY-F10213 |
DNA提取流程图:
实验步骤
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊(25:24:1)抽提两次,:异戊(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
生长激素 英文名称: growth hormone 规格: 48T/96T 英文缩写: HGH Przewaquinone A 76843-23-7 中文名:紫丹参甲素 分子式:C19H18O4 度:98.0% 关键词: 抗肿瘤; 鼠尾草属; 二萜醌; 中药对照品; 中药标准品; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库
生长分化因子-3 英文名称: growth differeiation factor 3 规格: 48T/96T 英文缩写: GDF-3 3-Nitro-1-(4-octylphenyl)-1-propanone 899822-97-0 中文名: 分子式:C17H25NO3 度:98.0% 关键词:
生长分化因子 -3(GDF-3) 作用: ELISA 规格: 48T/96T 进口分装 Nitrendipine 39562-70-4 中文名:尼群地平 分子式:C18H20N2O6
生长分化因子 -15(GDF-15) 作用: ELISA 规格: 48T/96T 进口分装 3-Nitro-1-(4-octylphenyl)-1-propanone 中文名: 分子式:C17H25NO3
生化检测试剂盒 3-Methylamino-1-(2-thienyl)-1-propanol 116539-55-0 中文名: 分子式:C8H13NOS 度:98.0%
L-苯甘甲酯盐酸盐 (s)-2-phenylglycine methyl ester 质量规格:0.98 大鼠水通道蛋白2(AQP-2)ELISA检测试剂盒RatAquaporin2,AQP-2ELISAKit 96T/48T
D-丙乙酯盐酸盐 H-D-Ala-OEt·HCl 质量规格:>98.5%,BR 人催乳素诱导蛋白(PIP)试剂盒 Human PIP ELISA Kit
利格列汀;利拉利汀 Linagliptin 质量规格:>99%,二肽肽酶-4(DPP-4)抑制剂 RaeceptoractivatorofnuclearfactorkappaBligand,RANKLELISAKit大鼠核因子κB受体活化因子配基(RANKL)ELISA试剂盒规格:96T/48T
L-谷-α-苄酯 L-Glutamic Acid 1-Benzyl Ester 质量规格:>98%,BR HIS标记蛋白化试剂盒5
L-亮乙酯盐酸盐 H-Leu-OEt·HCl 质量规格:>98% MouseVascuoarendothelialcellgrowthfactorreceptor2,VEGFR-2/Flk-1ELISA试剂盒小鼠血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR-2/Flk-1)ELISA试剂盒规格:96T/48T
L-丙氨酰胺盐酸盐 L-Alanamine 质量规格:>97%,BR 小鼠巨噬细胞炎性蛋白1δ(MIP-1δ/CCL15)ELISA试剂盒 ,英文名: MIP-1δ/CCL15 ELISA Kit
L-组盐酸盐 L-Histidine monohydrate mono 质量规格:>99%,一水 大鼠水通道蛋白0(AQP-0)ELISA检测试剂盒RatAquaporin0,AQP-0ELISAKit 96T/48T
L-高精盐酸盐 L-Homoarginine 质量规格:>98%,BR 人催乳素抑制激素(PIH)试剂盒 Human PIH ELISA Kit
TPCK(进分) TPCK 质量规格:>97%,进分,Sigma T4376 RaegulatedonactivationinnormalT-cellexpressedandsecreted,RAESELISAKit大鼠正常T细胞表达和分泌因子(RAES/CCL5)ELISA试剂盒规格:96T/48T
TPCK TPCK 质量规格:>97%,BR HIS标记蛋白扩增试剂盒10
钙黄绿素,超纯级细胞基质金属(MMP-7)活性比色法定量检测试剂盒
体液基质金属(MMP-7)活性荧光定量检测试剂盒
组织基质金属(MMP-7)活性荧光定量检测试剂盒
细胞基质金属(MMP-7)活性荧光定量检测试剂盒
体液基质金属(MMP-3)活性比色法定量检测试剂盒
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物*分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。