DAPI溶液(5mg/ml)
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DAPI溶液(5mg/ml)

参考价: 面议

具体成交价以合同协议为准
2022-04-21 10:39:12
476
属性:
供货周期:现货;规格:5mg/ml×0.2ml;货号:GOY-01X9551;应用领域:化工;主要用途:公司产品仅供科研;英文名称:DAPI Solution;
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产品属性
供货周期
现货
规格
5mg/ml×0.2ml
货号
GOY-01X9551
应用领域
化工
主要用途
公司产品仅供科研
英文名称
DAPI Solution
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上海谷研实业有限公司

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产品简介

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AT1R (Whole s

详细介绍

以下是细胞生物学试剂的详细介绍:

中文名称

英文名称

产品规格

发货周期

DAPI溶液(5mg/ml)

DAPI Solution

5mg/ml×0.2ml

1~3天

商品介绍:

本品DAPI是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料。和双链DNA结合后可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光。和EB(ethidium bromide)相比,对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。

DAPI染色常用于细胞凋亡检测,染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。DAPI也常用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色。

DAPI的大激发波长为340nm,大发射波长为488nm;DAPI和双链DNA结合后,大激发波长为364nm,大发射波长为454nm。

本DAPI溶液用水配制,浓度为5mg/ml。用于细胞核染色时,推荐的DAPI工作浓度为0.5-10μg/ml。

CAS:28718-90-3

分子式:C16H15N5·2HCl

分子量:350.25

储存条件:-20℃避光,有效期一年。

公司产品仅用于科研细胞培养操作规程:

一.培养基及培养冻存条件准备:

1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO),90%;优质胎牛血清,10%。

2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。

3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。

二.细胞处理:

1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:

方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

操作步骤:

1. 样品染色

1) 将Binding Buffer(10×)稀释成1×Binding buffer工作液备用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml无菌去离子水)。

2) 对于悬浮细胞,500-1000g离心5min收集细胞。

对于贴壁细胞,要用不含EDTA的胰酶消化细胞,胰酶消化时间不宜过长或过短,最好是在轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时,加入细胞培养液,将细胞轻轻吹打下来,转移到离心管内,500-1000g离心5min收集细胞。

3) 收集细胞后,加入预冷PBS溶液轻摇或用移液器轻柔吹打洗涤,离心收集细胞,共洗涤两次。

4) 在细胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重悬细胞,使细胞浓度达到1×106 cell/ml。

5) 吸取100μl细胞悬液(细胞总数为1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,轻轻混匀,室温避光孵育15min。

2. 样品检测

1) 流式细胞仪检测:

染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混匀后使用流式细胞仪检测(1小时内检测)。

建议设置经凋亡诱导的正常细胞、PI单染和Annexin V-FITC单染3个对照组,正常细胞组可作为荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。结果可用CellQuest等软件进行分析,绘制双色散点图(two-color dot plot),FITC为横坐标,PI为纵坐标。Annexin V-FITC和PI联合使用时,活细胞仅有很低强度的背景荧光,早期凋亡细胞仅有较强的绿色荧光,晚期凋亡细胞有绿色和红色双重荧光。

2) 荧光显微镜检测:

染色孵育后涂片,显微镜下观察。使用荧光显微镜上的蓝光和绿光通道分别观察FITC和PI。被Annexin V-FITC结合的细胞显示浆膜上有绿色光环。丧失细胞膜完整性的细胞,细胞核显示红色,膜上有绿色光环。
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