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以下是细胞生物学试剂的详细介绍：
| 中文名称 | 英文名称 | 产品规格 | 发货周期 |
| MTT检测试剂盒 | MTT Assay Kit | 500次 | 1～3天 |
商品介绍：
| MTT广泛用于检测细胞生长，其原理是MTT可以被活细胞线粒体内的脱氢酶还原生成深紫色的formazan结晶，而死细胞则无此活性。深紫色的formazan结晶被溶解后可以通过测定490nm波长的光吸收而测定出其浓度，并由此推测出细胞的活力，细胞增殖越旺盛，则吸光度越高；细胞毒性越大，则吸光度越低。 产品特点： 1．采用*的Formazan溶解液，可以充分溶解formazan，减少误差。 2．背景低，灵敏度高，线性范围宽，重复性好。 3．本产品为足够500次(5个96孔细胞培养板)微孔板检测。 4．可用于生物活性因子活性检测、抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验、肿瘤放射敏感性测定等 储存条件：低温运输、-20℃保存(但溶液B也可以常温运输和保存)，有效期一年。 使用方法： 下面操作是检测细胞毒性的试验，其他应用跟此类似或更简单(如生长曲线试验)，操作步骤可以以此为基础稍作修改即可，故不再赘述。 ㈠、接种细胞 1．按常规胰酶消化法消化汇合的单层细胞，收集到含血清的培养基中。 2．200g离心5分钟收集细胞沉淀。 3．用培养基重悬细胞沉淀，制备成单细胞悬浮液并计数。 4．将细胞稀释到2.5×103个/mL～5×10个/mL之间(需要根据细胞的生长速度决定)，如果不知道生长数度，一般可以稀释到1×10个/mL。 5．将足够量的细胞悬液转移到培养皿中(便于用排枪取样)。一个96孔板的MTT检测需要约20mL的细胞悬液。 6．用排枪在96孔板除的第2-11列各孔正中央加入200μL细胞悬液(对正常细胞)。如果是肿瘤细胞，则加入100μL肿瘤细胞悬液和100μL培养基(总体积为200μL)。注意：一定要把细胞加在孔的正中，否则细胞会聚集在孔的角落处，影响试验。 7．用排枪在96孔板除的第1和第12各孔中加入跟细胞悬液等体积的培养基。第1 列各孔将作为+培养基-细胞+MTT对照(用于测OD时调零)，第12列加培养基的作用是减少边缘效应对第11 列反应的影响。 8．按常规细胞培养方法在37℃和5% CO2条件下孵育1-3天，使细胞进入指数生长期。 ㈡、药物处理 9．用培养基将药物稀释到8个待测浓度(如果不知道待测浓度，则需要预试验确定)，一般一种药物需要做3块平行板。 10．去除第2到第11列(共10列)各孔中的培养基(不要触动细胞)，保留第1 列和第12列各孔中的培养基。 11．在第2和第11列(共2列)的各孔中加入200μL新鲜培养基，这些孔将作为+培养基+细胞-药物的对照。 12．在第3到第10列(共8列)各孔中加入8个浓度梯度的待测药物，每列加入一个浓度的药物。 13．按常规方法把96孔板继续放在在37℃和5% CO2条件下孵育一定的时间，此段时间即为药物处理细胞的时间，由用户自己决定。 14．处理结束后去除第2 到第11列(共10列，均含细胞)所有孔中的培养基，并再加入100μL新鲜培养基。 15．每天换培养使细胞数量扩增2-3倍(所需时间随细胞不同而不同)。 ㈢、存活细胞计数 16．在生长末期，去除第1到第11列各孔中的培养基后，再加入100μL新鲜培养基和10μL溶液A(含MTT成分)，用锡箔包裹住96孔板后放在37℃和5% CO2条件下继续培养4-8小时。注意：溶液A在低温情况下会凝固，使用前请室温放置或20-25℃水浴至全部溶解，摇匀后使用。MTT有致癌性，一定要带手套操作。 17．小心吸弃孔内培养基(含溶液A)。由于培养基可能会影响光吸收，最好尽可能去除。 18．每孔加入100μL溶液B，置摇床上低速振荡10分钟，使MTT形成的formazan结晶物充分溶解。 19．由于产物不稳定，故需要立即在酶联免疫检测仪上选择490nm测定吸光度。 注意：用第1 列各孔(+培养基-细胞+MTT对照)调零。 20．计数同样处理的各次重复的平均值。 21．以药物浓度为横轴，以吸光度为纵轴绘制曲线。由于各处理吸光度绝对值差别很大，一般需将其转化成生长抑制率(以不加药物的第2和第11列各孔数据的平均数作为100%)，这样便于计算出IC50，用于各种药物处理效果的比较。注意：如果测生长曲线，则以时间为横轴。正常生长曲线一般呈现S型，具有促进作用的则斜率加大。 |
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
操作步骤：
1. 样品染色
1) 将Binding Buffer（10×）稀释成1×Binding buffer工作液备用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml无菌去离子水）。
2) 对于悬浮细胞，500-1000g离心5min收集细胞。
对于贴壁细胞，要用不含EDTA的胰酶消化细胞，胰酶消化时间不宜过长或过短，最好是在轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时，加入细胞培养液，将细胞轻轻吹打下来，转移到离心管内，500-1000g离心5min收集细胞。
3) 收集细胞后，加入预冷PBS溶液轻摇或用移液器轻柔吹打洗涤，离心收集细胞，共洗涤两次。
4) 在细胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重悬细胞，使细胞浓度达到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl细胞悬液（细胞总数为1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，轻轻混匀，室温避光孵育15min。
2. 样品检测
1) 流式细胞仪检测：
染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混匀后使用流式细胞仪检测（1小时内检测）。
建议设置经凋亡诱导的正常细胞、PI单染和Annexin V-FITC单染3个对照组，正常细胞组可作为荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。结果可用CellQuest等软件进行分析，绘制双色散点图（two-color dot plot），FITC为横坐标，PI为纵坐标。Annexin V-FITC和PI联合使用时，活细胞仅有很低强度的背景荧光，早期凋亡细胞仅有较强的绿色荧光，晚期凋亡细胞有绿色和红色双重荧光。
2) 荧光显微镜检测：
染色孵育后涂片，显微镜下观察。使用荧光显微镜上的蓝光和绿光通道分别观察FITC和PI。被Annexin V-FITC结合的细胞显示浆膜上有绿色光环。丧失细胞膜完整性的细胞，细胞核显示红色，膜上有绿色光环。
Micrococcal Nuclease 8000 units
Exonuclease III 4000 units
RNase H 100 units
RNase H 500 units
S1 Nuclease 10000 units
Uracil-DNA Glycosylase 200 units
Uracil-DNA Glycosylase 5x200 units
DNase I, RNase-free 1000 units
DNase I, RNase-free, HC 1000 units
DNase I, RNase-free (supplied with MnCl2) 1000 units
RNase A, DNase and protease-free 10 mg
RNase T1 100000 units
RNase T1 500000 units
RNase A/T1 Mix 1 ml
Lambda Exonuclease 1000 units
Lambda Exonuclease 5000 units
Exonuclease I 4000 units
Exonuclease I 20000 units
Endonuclease IV, E.coli 100 units
RNase I 1000 units
RNase I 5000 units
RiboLock™ RNase Inhibitor 2500 units
RiboLock™ RNase Inhibitor 4x2500 units
三磷酸腺苷结合盒亚家族G1抗体
脂联素受体2抗体
ANGEL1蛋白抗体
ANGEL2蛋白抗体
ANKLE2蛋白抗体
睾丸特异性锚样蛋白1抗体
锚蛋白重复结构域蛋白13B抗体
锚蛋白重复结构域蛋白20A1抗体
锚蛋白重复结构域蛋白20A3抗体
锚蛋白重复结构域蛋白22抗体
锚蛋白重复结构域蛋白50抗体
氢离子转运ATP合成酶6G抗体
锚蛋白重复结构域蛋白26抗体
锚蛋白重复结构域蛋白26抗体
丙型肝炎病毒核结合蛋白-1抗体
芳香基硫酸酯酶K抗体
神经元突触前膜蛋白抗体
锚定蛋白G抗体
肌动蛋白α/α-SMA/α Actin抗体
MTT检测试剂盒整合素样金属蛋白酶与凝血酶1型抗体
整合素样金属蛋白酶与凝血酶1型-7抗体
整合素样金属蛋白酶与凝血酶1型-7抗体
内收蛋白抗体
脂肪组织分化相关蛋白抗体
