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商品介绍:
本品Hoechst 33258是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料,对细胞的毒性较低。 Hoechst 33258染色常用于细胞凋亡检测,染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。Hoechst 33258也常用于普通的细胞核染色,或常规的DNA染色。 Hoechst 33258的大激发波长为346nm,大发射波长为460nm;Hoechst 33258和双链DNA结合后,大激发波长为352nm,大发射波长为461nm。 Hoechst 33258溶于水,溶解度可达10mg/ml。用于细胞核染色时,推荐的Hoechst 33258工作浓度为0.5-10μg/ml。 CAS:23491-45-4 分子式:C25H24N6O·3HCl 分子量:533.88 储存条件:-20℃避光,有效期一年。 |
以下是细胞生物学试剂的详细介绍:
中文名称 | 英文名称 | 产品规格 | 发货周期 |
Hoechst 33258 | 10mg | 1~3天 |
操作步骤:
1. 样品染色
1) 将Binding Buffer(10×)稀释成1×Binding buffer工作液备用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml无菌去离子水)。
2) 对于悬浮细胞,500-1000g离心5min收集细胞。
对于贴壁细胞,要用不含EDTA的胰酶消化细胞,胰酶消化时间不宜过长或过短,最好是在轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时,加入细胞培养液,将细胞轻轻吹打下来,转移到离心管内,500-1000g离心5min收集细胞。
3) 收集细胞后,加入预冷PBS溶液轻摇或用移液器轻柔吹打洗涤,离心收集细胞,共洗涤两次。
4) 在细胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重悬细胞,使细胞浓度达到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl细胞悬液(细胞总数为1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,轻轻混匀,室温避光孵育15min。
2. 样品检测
1) 流式细胞仪检测:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混匀后使用流式细胞仪检测(1小时内检测)。
建议设置经凋亡诱导的正常细胞、PI单染和Annexin V-FITC单染3个对照组,正常细胞组可作为荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。结果可用CellQuest等软件进行分析,绘制双色散点图(two-color dot plot),FITC为横坐标,PI为纵坐标。Annexin V-FITC和PI联合使用时,活细胞仅有很低强度的背景荧光,早期凋亡细胞仅有较强的绿色荧光,晚期凋亡细胞有绿色和红色双重荧光。
2) 荧光显微镜检测:
染色孵育后涂片,显微镜下观察。使用荧光显微镜上的蓝光和绿光通道分别观察FITC和PI。被Annexin V-FITC结合的细胞显示浆膜上有绿色光环。丧失细胞膜完整性的细胞,细胞核显示红色,膜上有绿色光环。
公司产品仅用于科研细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
免疫球蛋白A(IgA)英文名称:IgA ELISA Kit磷化促肾上腺皮质激ACTH抗体包装25mg
轮状病毒(RV)抗原(Ag)英文名称:Ag ELISA Kit磷化蛋白激AKT1抗体包装25g
卵清蛋白特异性IgG(OVA sIgG)英文名称:OVA sIgG ELISA Kit磷化蛋白激B抗体包装1g
卵清蛋白特异性IgE(OVA sIgE)英文名称:OVA sIgE ELISA Kit磷化钠ATP蛋白a1抗体包装100g
卵泡抑(FS)英文名称:FS ELISA Kit磷化内收蛋白a1抗体包装25g
硫氧化还原蛋白(Trx)英文名称:Trx ELISA Kit磷化腺苷单磷活化蛋白激α1抗体包装1g
硫氧还蛋白还原(TrxR)英文名称:TrxR ELISA Kit磷化腺苷单磷活化蛋白激α2抗体包装250mg
磷脂酰丝(PS)英文名称:PS ELISA Kit性神经酰1抗体包装1g
磷脂酰肌抗体IgG/IgM(PI Ab-IgG/IgM)英文名称:PI Ab-IgG/IgM ELISA Kit粘附调节分子1抗体包装1g
磷脂酰肌蛋白聚糖3(GPC-3)英文名称:GPC-3 ELISA Kit气味结合蛋白抗体包装5g
磷脂D2(PLD2)英文名称:PLD2 ELISA Kit乙脱氢2抗体包装1g
磷脂A2(PL-A2)英文名称:PL-A2 ELISA Kit膜粘连蛋白10抗体包装1g
磷脂肌3激(PI3-K)英文名称:PI3-K ELISA Kit前梯度同源蛋白2抗体包装250mg
磷腺苷(cAMP)英文名称:cAMP ELISA Kit乙脱氢5抗体包装100g
磷烯式羧激(PCK)英文名称:PCK ELISA Kit通用转录因子IIA样因子抗体包装25g
ATP结合蛋白家族7抗体免疫球蛋白G(IgG)Torezolid (TR-701; tedizolid) is a novel oxazolidinone for gram-positive infecti
Hoechst 33258细胞蓝色荧光染料白僵 2,3-二甲氧基成熟促进因子检测试剂盒
卡卡杜儿玉氏酵母 苯甲酰甲酸甲酯成纤维活化蛋白检测试剂盒
酿酒酵母 氨基乙硫酸氢盐成纤维生长因子检测试剂盒
黑曲霉 4-吗啉成纤维生长因子10检测试剂盒
阿穆尔斯克湾盐地杆 磷酸三聚成纤维生长因子19检测试剂盒
簇生离褶伞 4-氨基-2-羟基嘧啶-5-羧酸乙酯成纤维生长因子21检测试剂盒
盖囊侧耳 4-溴-5-氯-2-氟甲苯成纤维生长因子23检测试剂盒
草类芽孢杆 2,6-二溴吡啶-4-羧酸程序性死亡分子-1检测试剂盒
锗栓孔 甘氨酸亚铁程序性死亡配体-1检测试剂盒
平菇 3-甲基-2-(4-)丁酸穿孔蛋白1检测试剂盒
群结腐霉 5-溴-1H--3-甲垂草扁桃酸检测试剂盒
非食用色素俾士麦棕对照液 (4-甲氧苯基)肼垂体中叶素检测试剂盒
毛柄(金针菇) 4-氯-5-甲基-2氨基嘧啶雌二检测试剂盒
酿酒酵母 4-溴-3-羟基苯甲雌检测试剂盒
白耙齿 4-硝基-1,3-苯二硫酸盐雌受体检测试剂盒