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以下是细胞生物学试剂的详细介绍:
中文名称 | 英文名称 | 产品规格 | 发货周期 |
20T | 1~3天 |
商品介绍:
保存条件:-20℃冰冻保存。 保存期:一年 工作原理: 在机体内部随时都在发生着细胞的死亡。传统上用显微镜来观察细胞的死亡,其特征为核染色质的浓缩及碎片的形成。但是这种现象出现的很晚,时间也很短暂。凋亡的特征是内源性核酸内切酶被激活,细胞自身的染色质或DNA 被切割,出现单链或双链缺口,并产生与 DNA 断点数目相同的3’-OH 末端。末端脱氧核糖核酸转移酶(Terminal deoxynucleotidyl Transferase)可以将标记的dUTP(DIG-dUTP)标记至 3’-OH 末端,DIG-dUTP 结合在 DNA 断点部位,可以通过生物标记的抗抗体(Anti-DIG-Biotin)反应后,再结合荧光素 FITC或者过氧化物酶 POD 标记的链酶亲和素(SABC-FITC/SABC-POD)。FITC 在 490-495nm 激化,在 520-530nm 发射荧光,在荧光显微镜下呈明亮黄绿色。POD的在加入显色底物 DAB 显色后,凋亡的细胞核呈棕黄色。用户根据实验需要,在不同切片上用两套不同显示系统观察。 试剂盒内容: 1.标记缓冲液(Labeling Buffer)1ml 2.末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT,×20)20μl 3.DIG-dUTP(×20)20μl 4.封闭液(Blocking Reagent)4ml 5.生物素化抗抗体(× 100)20μl 6.SABC-FITC(× 100)20μl 7.SABC-POD(× 100)20μl 8.Proteinase K(×200)50μl 9.抗体稀释液 4ml 10.未染色阳性对照片 2 张。 |
公司产品仅用于科研细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
操作步骤:
1. 样品染色
1) 将Binding Buffer(10×)稀释成1×Binding buffer工作液备用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml无菌去离子水)。
2) 对于悬浮细胞,500-1000g离心5min收集细胞。
对于贴壁细胞,要用不含EDTA的胰酶消化细胞,胰酶消化时间不宜过长或过短,最好是在轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时,加入细胞培养液,将细胞轻轻吹打下来,转移到离心管内,500-1000g离心5min收集细胞。
3) 收集细胞后,加入预冷PBS溶液轻摇或用移液器轻柔吹打洗涤,离心收集细胞,共洗涤两次。
4) 在细胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重悬细胞,使细胞浓度达到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl细胞悬液(细胞总数为1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,轻轻混匀,室温避光孵育15min。
2. 样品检测
1) 流式细胞仪检测:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混匀后使用流式细胞仪检测(1小时内检测)。
建议设置经凋亡诱导的正常细胞、PI单染和Annexin V-FITC单染3个对照组,正常细胞组可作为荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。结果可用CellQuest等软件进行分析,绘制双色散点图(two-color dot plot),FITC为横坐标,PI为纵坐标。Annexin V-FITC和PI联合使用时,活细胞仅有很低强度的背景荧光,早期凋亡细胞仅有较强的绿色荧光,晚期凋亡细胞有绿色和红色双重荧光。
2) 荧光显微镜检测:
染色孵育后涂片,显微镜下观察。使用荧光显微镜上的蓝光和绿光通道分别观察FITC和PI。被Annexin V-FITC结合的细胞显示浆膜上有绿色光环。丧失细胞膜完整性的细胞,细胞核显示红色,膜上有绿色光环。
补体1抑制因子(C1INH)英文名称:C1INH ELISA Kit9号染色体开放阅读框86抗体包装5g
补体1q(C1q)英文名称:C1q ELISA Kit钙粘附分子18抗体包装25g
脱氢磷(PDP)英文名称:PDP ELISA KitCD276抗体包装5g
脱氢激同工4(PDK4)英文名称:PDK4 ELISA Kit21号染色体开放阅读框25抗体包装1g
脱氢β(PDHβ)英文名称:PDHβ ELISA Kit22号染色体开放阅读框36抗体包装5g
脱氢α(PDHα)英文名称:PDHα ELISA Kit补体组分1q子成分样蛋白1抗体包装1g
羧化(PC)英文名称:PC ELISA KitCD44抗体包装25g
糖磷异构1(TPI1)英文名称:TPI1 ELISA Kit9号染色体开放阅读框114抗体包装5g
别孕烯(AP)英文名称:AP ELISA KitCD8β链(CD8-β)抗体包装100mg
表皮转谷酰胺(TGM3)英文名称:TGM3 ELISA Kit6号染色体开放阅读框1抗体包装25g
表皮调节(EREG)英文名称:EREG ELISA Kitγ晶状体蛋白S/γS-crystallin抗体包装5g
表皮生长因子受体2(EGFR2)英文名称:EGFR2 ELISA Kit9号染色体开放阅读框72抗体包装25g
表面活性物质关联蛋白D(SPD)英文名称:SPD ELISA Kit钙粘附分子10抗体包装5g
表面活性物质关联蛋白A(SPA)英文名称:SPA ELISA KitR Cadherin/CDH4包装25g
表睾(ET)英文名称:ET ELISA Kit大鼠细小病H-1株(H-1)抗体包装5g
苏云金芽孢杆菌Bacillus│thuringiensis 质量规格:>98%,BR幽门螺旋菌IgG试剂盒乙酰蝙蝠葛苏林碱;O-diacetyld
大肠埃希菌Escherichia│coli 质量规格:分析标准品幽门螺旋杆菌IgM试剂盒一叶萩碱;Securinine
胶孢刺盘孢Colletotrichum│gloeosporioides 质量规格:>98%,BR硬骨试剂盒异荭草; Homoorientin
细胞凋亡检测试剂盒IV(FITC+POD)纤维纤维微 甘氨酸铜风疹病抗体Elisa
冷温木拉克酵母 硅酸四钠盐吸血虫抗体Elisa
斯氏土地杆 2-甲基-1,3-苯并恶唑-6-羧酸CD34分子Elisa
大肠埃希氏 双(4-基苯基)甲肿瘤干标记物Elisa
弗雷德里克斯堡假单胞 3-溴-2,6-二甲氧基吡啶Parkin蛋白Elisa
克鲁斯假丝酵母 5''-溴-3,3''-二辛基-[2,2':5',2''-三噻吩]-5-甲维生BElisa
小壳焦孢属 羟钴金黄色葡萄球肠BElisa
酿酒酵母 3-氟-5-溴苯金黄色葡萄球肠CElisa
酿酒酵母 棕榈酸异辛酯金黄色葡萄球肠EElisa
蜡状芽孢杆 2,4-二氯烟前列腺H2Elisa
苏云金芽孢杆 2-乙黄原酸基异丁酸超氧化物歧化Elisa
白僵 (1R,2R)-2-氨基环己盐酸盐二氢蝶啶还原Elisa
传染性喉气管炎病 (1S,2S)-2-氨基环己盐酸盐CD73分子Elisa
酿酒酵母 肉桂肟, mixed isomers7-脱氢胆固还原Elisa
矩圆黑盘孢 2-氨基-5-溴-4-甲基噻唑盐酸盐肝微粒体混合功能氧化Elisa