Caspase 1 活性检测试剂盒
Caspase 1 活性检测试剂盒
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Caspase 1 活性检测试剂盒

Caspase 1 活性检测试剂盒

参考价: 面议

具体成交价以合同协议为准
2022-04-21 10:18:18
439
属性:
供货周期:现货;规格:20次|100次;货号:GOY-01X9539;应用领域:化工;主要用途:公司产品仅供科研;英文名称:Caspase 1 Activity Assay Kit;
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产品属性
供货周期
现货
规格
20次|100次
货号
GOY-01X9539
应用领域
化工
主要用途
公司产品仅供科研
英文名称
Caspase 1 Activity Assay Kit
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上海谷研实业有限公司

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产品简介

Caspase 1 活性检测试剂盒公司正在出售的产品:APS APS抗体N,N-二 standard for GC, ≥99.5% (GC)
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详细介绍

以下是细胞生物学试剂的详细介绍:

中文名称

英文名称

产品规格

发货周期

Caspase 1 活性检测试剂盒

Caspase 1 Activity Assay Kit

20次|100次

1~3天


商品介绍:

本试剂盒是采用分光光度法检测细胞或组织裂解液中caspase 1酶活性或纯化的caspase 1酶活性的试剂盒。本试剂盒用酶标仪检测或容量不超过100μl的分光光度检测杯检测时,除标准曲线外可以检测20个样品。

试剂盒组分:

裂解液——————8ml

检测缓冲液——————8ml

Ac-YVAD-pNA(2mM)———200μl

pNA(10mM)——————200μl

Caspase是一个在细胞凋亡过程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase 1也称interkeukin 1b conberting enzyme(ICE),有时被写作caspase-1或caspase 1,是caspase家族中可以剪切IL-1b前体蛋白或IL-18前体产生相应成熟的细胞因子的caspase。Caspase 11可以剪切45kD的caspase 1前体蛋白,产生20kD和10kD的片段,这两个片段可以形成异源二聚体(heterodimer),并进一步由两个异源二聚体形成四聚体。Caspase 1可以通过剪切其凋亡Bcl-XL来调节细胞凋亡,并通过其对一些细胞因子前体的剪切来调控相关免疫反应。

本caspase 1活性检测试剂盒是基于caspase 1可以催化底物Ac-YVAD-pNA(acetyl-Tyr-Val-Ala-Asp p-nitroanilide)产生黄色的pNA(p-nitroaniline),从而可以通过测定吸光度来检测caspase 1的活性。pNA在405nm附近有强吸收。

试剂盒中提供了caspase 1催化产生的黄色产物pNA,可以作为定量caspase 1酶活性的标准品。

储存条件:-20℃。

公司产品仅用于科研细胞培养操作规程:

一.培养基及培养冻存条件准备:

1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO),90%;优质胎牛血清,10%。

2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。

3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。

二.细胞处理:

1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:

方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

操作步骤:

1. 样品染色

1) 将Binding Buffer(10×)稀释成1×Binding buffer工作液备用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml无菌去离子水)。

2) 对于悬浮细胞,500-1000g离心5min收集细胞。

对于贴壁细胞,要用不含EDTA的胰酶消化细胞,胰酶消化时间不宜过长或过短,最好是在轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时,加入细胞培养液,将细胞轻轻吹打下来,转移到离心管内,500-1000g离心5min收集细胞。

3) 收集细胞后,加入预冷PBS溶液轻摇或用移液器轻柔吹打洗涤,离心收集细胞,共洗涤两次。

4) 在细胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重悬细胞,使细胞浓度达到1×106 cell/ml。

5) 吸取100μl细胞悬液(细胞总数为1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,轻轻混匀,室温避光孵育15min。

2. 样品检测

1) 流式细胞仪检测:

染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混匀后使用流式细胞仪检测(1小时内检测)。

建议设置经凋亡诱导的正常细胞、PI单染和Annexin V-FITC单染3个对照组,正常细胞组可作为荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。结果可用CellQuest等软件进行分析,绘制双色散点图(two-color dot plot),FITC为横坐标,PI为纵坐标。Annexin V-FITC和PI联合使用时,活细胞仅有很低强度的背景荧光,早期凋亡细胞仅有较强的绿色荧光,晚期凋亡细胞有绿色和红色双重荧光。

2) 荧光显微镜检测:

染色孵育后涂片,显微镜下观察。使用荧光显微镜上的蓝光和绿光通道分别观察FITC和PI。被Annexin V-FITC结合的细胞显示浆膜上有绿色光环。丧失细胞膜完整性的细胞,细胞核显示红色,膜上有绿色光环。
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