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商品介绍:
AO/EB双染细胞凋亡检测试剂盒是采用DNA探针双染细胞核的方法检测细胞的状态。橙(AO)具有膜通透性,能透过细胞膜,使核DNA和RNA染色。其激发波长为488nm,吸收波长为515nm。它与细胞中DNA和RNA 结合量存在差别,复合物可发出不同颜色的荧光,红色荧光为AO-DNA(F>600nm),绿色荧光为AO-RNA或单链DNA(F>530nm)。因此,在荧光显微镜下观察,橙可透过正常细胞膜,使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光;而在凋亡细胞中,因染色质固缩或断裂为大小不等的片断,形成凋亡小体。橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光,或黄绿色碎片颗粒;而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。橙AO 常与溴化乙啶EB 合用双染,因EB 只染死细胞使之产生桔黄色荧光,由此可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。 储存条件:A液和B液-20℃避光保存。C液2-8℃保存。 有效期:一年。 |
产品属性:
中文名称:AO/EB双染试剂盒
英文名称:
产品规格:100T
发货周期:1~3天
公司产品仅用于科研
细胞生物学研究有以下几个方面:
细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括:
①细胞核、染色体以及基因表达的研究;
②生物膜与细胞器的研究;
③细胞骨架体系的研究;
④细胞增殖及其调控;
⑤细胞分化及其调控;
⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡);
⑦细胞的起源与进化;
⑧细胞工程.
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。
8、结果分析
a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)
托瑞米芬英文名称: Cyclosporine A磷化原癌基因c-kit抗体包装5g
拓扑替康盐盐英文名称: Ticlopidine HCl磷化原癌基因c-kit抗体包装5g
维酰酚英文名称: Ticlopidine HCl胸腺基质淋巴生成受体抗体包装25g
维罗非尼,RG7204英文名称: Cytarabine磷化非受体酪激c-Abl抗体包装5g
戊柔比星英文名称: Cytarabine磷化非受体酪激c-Abl抗体包装1g
西地尼布;AZD2171英文名称: Cytarabine蛋白磷激PKC/CPI-17抗体包装5g
西地尼布马来盐英文名称: Dacarbazine磷化非受体酪激c-Abl抗体包装1g
亚叶钙英文名称: Dacarbazine磷化非受体酪激c-Abl抗体包装1g
盐阿糖胞苷英文名称: Dasatinib胰辅脂抗体包装5g
盐埃罗替尼英文名称: Dasatinib19号染色体开放阅读框45抗体包装5MG
盐昂丹司琼英文名称: Daptomycin过氧化氢诱导转录蛋白1抗体包装5MG
盐达莫司汀英文名称: Daptomycin核因子NFκB激活蛋白1抗体包装100g
盐表阿霉英文名称: Daunorubicin HCl第12号染色体开放阅读框23抗体包装25g
盐多柔比星/盐阿霉英文名称: Daunorubicin HClγ-连环/连接蛋白γ抗体包装5g
盐米托蒽醌英文名称: Daunorubicin HCl10号染色体开放阅读框4抗体包装100g
链霉菌属Streptomyces│sp. 质量规格:含量测定胰岛受体底物2试剂盒盐拓扑替康;Topotecan hyd
胶孢Glomerella│cingulata (Stoneman) Spauld. & H. Schrenk 质量规格:>99.0%胰岛受体底物1试剂盒延龄草苷;Diosgenin gluco
小珊瑚球菌Corallococcus│exiguus 质量规格:HPLC>99.0%,标准品胰岛受体β试剂盒异槲皮;Isoquercitrin
AO/EB双染试剂盒山羊葡萄球 新生牛血清500ml/XQ-A0500磷酸化信号转导分子SMAD-2Elisa
克鲁斯假丝酵母 新生牛血清100ml/XQ-A0100磷酸化信号转导分子SMAD-7Elisa
泡盛曲霉 新生牛血清50ml/XQ-A0050核糖基转移1Elisa
薄层 稳定剂,500ml装/CT-0500脂联β样1Elisa
酿酒酵母 稳定剂,200ml装/CT-0200胰岛抗体Elisa
稳定剂,50ml装/CT-0050神经调节蛋白4Elisa
仙芝(灵芝属之一种) 稳定剂,10ml装/CT-0010血管紧张转化1Elisa
香菇 蛋白/稳定剂/PS-050血管紧张转化1Elisa
嗜盐细属 蛋白/稳定剂/PS-010流行性出血热IgG抗体Elisa
短小克银汉霉 蛋白/稳定剂/PS-00115-deoxy-前列腺J2Elisa
伤寒沙门氏 粘附液/301-026-015抗能受体M2抗体Elisa
干草鞘氨单胞 粘附液/301-025-015CD64分子Elisa
黄杆 蛋白胶染液 /300-692-1000磷酸乙酸磷酸Elisa
假单胞属 蛋白胶染液 /300-692-500p38丝裂原活化蛋白激Elisa
天青链霉 AquaSafe 安全保鲜剂/22-100-01神经肽SElisa