通用型PCR试剂盒
通用型PCR试剂盒
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通用型PCR试剂盒

20μL×400次通用型PCR试剂盒

参考价: 面议

具体成交价以合同协议为准
2022-04-22 14:21:37
280
属性:
供货周期:现货;货号:GOY-F10283;应用领域:化工;主要用途:仅供科研使用;
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产品属性
供货周期
现货
货号
GOY-F10283
应用领域
化工
主要用途
仅供科研使用
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上海谷研实业有限公司

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产品简介

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详细介绍

产品详细介绍:

PCR试剂盒带有Taq DNA   PolymerasePCR bufferdNTP和上样缓冲液,自备模板和引物即可进行PCR反应,适合用于普通的PCRRT-PCR定性或定量检测,也可以用于不太长的的DNA片段的克隆。

Taq DNA   Polymerase是一种来源于嗜热菌Thermus aquaticus的高度热稳定的DNA聚合酶,95℃孵育时的半衰期大于40分钟。Taq酶的分子量为94kDaTaq酶可以催化5'3'方向的依赖于DNA模板的脱氧核苷酸的聚合。Taq酶没有3'5'的外切酶活性,有非常低的5'3'外切酶活性。由于Taq酶没有3'5'的外切酶活性,因此在DNA聚合过程中相当于核苷酸转移酶的作用,终会导致PCR产物的3'末端会产生3'-dA overhangs,即产生带一个A3'粘端。本Taq DNA   Polymerase为重组酶,通过大肠杆菌表达纯化获得,和纯化获得的天然Taq DNA Polymerase在各方面的性质相同。

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产品规格

货号

通用型PCR试剂盒

Universal PCR   Kit with Taq

20μL×400|20μL×2000

GOY-F10283

 

DNA提取流程图:
QQ截图20220414142532.png
实验步骤
(1)
实验开始前将RNA提取液于65水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙),(10mL80ul,50mL中加入300ul)
(2)
取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65
水浴3-10 min,期间混匀2-3
(4)
加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4,5 min)
(5)
取上清,等体积的:异戊(24:1)抽提(10,000rpm,4,5 min)
(6)
加入1/4V体积10M LiCl溶液,4放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4
离心20min
(8)
弃上清,500ul SSTE溶解沉淀
(9)
::异戊(25:24:1)抽提两次,:异戊(24:1)抽提1(10,000rpm,4,5min)
(10)
2V体积的无水乙,-70冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4
离心20 min
(12)
弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)
200ulDEPC处理水溶解
(14)
用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(
在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
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操作步骤:
1.
匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅
b.
单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(3.5cm直径的培养板)1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNADNA污染。
c
.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
2
.将匀浆样品在室温(15-30)放置5分钟,使核酸蛋白复合物*分离。
3
.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-810000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5.
每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8
10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅
7.
把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙,室温放置10分钟。
8. 2-8
10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。


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