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反应五要素:
转基因植物Bt基因核酸检测试剂盒图片参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。
使用及效果:
将压碎的一小片重量约在100 mg 左右的植物种子(约1/4 黄豆大小)或直径约为0.5-0.7 cm(或面积相当的其他形状)的植物叶片直接加到新鲜配制的0.1 mL溶液A 中,95℃保温10-15 分钟,加入0.1 mL 溶液B,混匀,直接取上清液(相当于PCR 体积的1/10)作为模板进行PCR。剩余样品可以放4℃保存。
产品名称 | 规格 | 分类 |
转基因植物Bt基因核酸检测试剂盒图片 | 48T | PCR检测试剂盒 |
样本采集、存放及运输:
1、样本采集:各类型样本按照常规方法采集;
2、存放:样本在2~8℃条件下保存应不超过72h,-70℃以下可长期保存,但应避免反复冻融(zui多冻融3次);
3、运输:采用泡沫箱加冰密封进行运输。
普通PCR反应流程:
自备物品:
转基因植物Bt基因核酸检测试剂盒图片15毫升锥形离心管:用于制备样品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶标板:用于比色的容器
分光光度仪:用于比色分析
酶标仪:用于微量样品比色分析
储存条件:
14℃或-20℃
准备物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀释液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
产品说明书 1份
7-甲-8-硝喹啉分子式:188.19分子量: C10H8N2O2英文名称:7- methyl -8- nitro groupCAS号:7471-63-8
5--6-硝喹啉分子式:189.17分子量: C9H7N3O2英文名称:5- amino -6- nitro groupCAS号:35975-00-9
4,4’-二甲联分子式:182.27分子量: C14H14英文名称:4,4 '- two methyl groupCAS号:613-33-2
3-氯吲唑分子式:152.58分子量: C7H5ClN2英文名称:3- indazole chlorideCAS号:29110-74-5
4-羟咔唑分子式:183.21分子量: C12H9NO英文名称:4- hydroxy carbazoleCAS号:52602-39-8
4-甲硫酸氢氯酸嘧分子式:221.7分子量: C8H12ClNO2S英文名称:4- methyl benzyl sulfateCAS号:4393-16-2
磷酸二氢铝分子式:317.94分子量: AlH6O12P3英文名称:Two hydrogen phosphateCAS号:13530-50-2
3--4-吡甲醛分子式:122.12分子量: C6H6N2O英文名称:3- amino -4- pyridine formaldehydeCAS号:55279-29-3
(4S,4'S)-2,2'-(戊烷-3,3'-二)双(4-苄-4,5-二氢恶唑)分子式:390.53分子量: C25H30N2O2英文名称:(4S,4)-2,2'-(戊烷- 3,3’-二)双(4苄- 4,5 -二氢恶唑)CAS号:160191-64-0
性湖蓝V英文名称:Alphaurine VCAS号:129-17-9分子式:566.66分子量: C27H31N2NaO6S2
异茴芹内酯英文名称:IsopimpinellinCAS号:482-27-9分子式:246.22分子量:C13H10O5
转基因植物Bt基因核酸检测试剂盒图片Rabbit Anti-dog IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555标记的兔抗狗IgG 0.1ml
Notch1/MOTC 跨膜受体蛋白Notch-1抗体 0.1ml
Agpat2 溶血磷脂酸酰基转移酶β抗体 0.2ml
MTA2 转移相关蛋白2抗体 0.2ml
Calreticulin 钙网蛋白抗体 0.2ml
KLHDC9 KLHDC9蛋白抗体 0.2ml
Phospho-Met (Tyr1003) 磷酸化肝细胞生长因子受体(原癌基因)抗体 0.1ml
KCNMB1/Maxi Potassium channel beta 钙激活钾通道蛋白β1抗体 0.2ml
Rabbit Anti-Bovine IgM/PE-Cy3 PE-Cy3标记的兔抗牛IgM 0.1ml
phospho-TRADD(Ser299) 磷酸化肿瘤坏死因子受体1相关死亡域蛋白抗体 0.1ml
CD63/MLA1 黑色素瘤相关抗原抗体 0.1ml
K Cadherin 钙粘蛋白6抗体 0.2ml