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反应五要素:
猪乙型脑炎病毒(JEV)核酸检测试剂盒图片参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。
使用及效果:
将压碎的一小片重量约在100 mg 左右的植物种子(约1/4 黄豆大小)或直径约为0.5-0.7 cm(或面积相当的其他形状)的植物叶片直接加到新鲜配制的0.1 mL溶液A 中,95℃保温10-15 分钟,加入0.1 mL 溶液B,混匀,直接取上清液(相当于PCR 体积的1/10)作为模板进行PCR。剩余样品可以放4℃保存。
产品名称 | 规格 | 分类 |
猪乙型脑炎病毒(JEV)核酸检测试剂盒图片 | 48T | PCR检测试剂盒 |
样本采集、存放及运输:
1、样本采集:各类型样本按照常规方法采集;
2、存放:样本在2~8℃条件下保存应不超过72h,-70℃以下可长期保存,但应避免反复冻融(zui多冻融3次);
3、运输:采用泡沫箱加冰密封进行运输。
普通PCR反应流程:
自备物品:
猪乙型脑炎病毒(JEV)核酸检测试剂盒图片15毫升锥形离心管:用于制备样品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶标板:用于比色的容器
分光光度仪:用于比色分析
酶标仪:用于微量样品比色分析
储存条件:
14℃或-20℃
准备物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀释液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
产品说明书 1份
草氨酸钾分子式:127.14分子量: C2H2KNO3英文名称:Potassium potassiumCAS号:21141-31-1
四硼酸钾分子式:305.5分子量: K2B4O7·4H2O英文名称:Four boric acidCAS号:12045-78-2
4-苄吡分子式:169.22分子量: C12H11N英文名称:4- benzyl pyridineCAS号:2116-65-6
*砜分子式:106.14分子量: C3H6O2S英文名称:Three methyl groupCAS号:5687-92-3
2-乙酰吡分子式:121.14分子量: C7H7NO英文名称:2- acetyl pyridineCAS号:1122-62-9
硫代啉分子式:103.19分子量: C4H9NS英文名称:Ma LanCAS号:123-90-0
氯两面针碱英文名称:Chlorination of two needlesCAS号:13063-04-2分子式:383.82分子量:C21H18ClNO4
砷铁分子式:205.69分子量: As2Fe英文名称:Arsenic ironCAS号:12006-21-2
直接湖蓝6B英文名称:Direct blue 6BCAS号:259444分子式:992.8分子量: C34H24N6Na4O16S4
邻二胺英文名称:Two amineCAS号:95-54-5分子式:108.14分子量: C6H8N2
2-(N-L-丙)-5-硝吡分子式:273.29分子量: C14H15N3O3英文名称:2- (N-L-) -5-CAS号:115416-53-0
COX5A 细胞色素c氧化酶5A抗体 0.2ml
Phospho-CHK2 (ser33) 磷酸化细胞周期检测点激酶2抗体 0.1ml
SPHK2 鞘氨醇激酶2抗体 0.2ml
ATGL 脂肪甘油三酯脂酶抗体 0.1ml
MAP4K4 丝裂原活化蛋白激酶MAP4K4抗体 0.1ml
phospho-GSK-3 Beta(Ser21+Ser29) 磷酸化葡萄糖合成激酶3β抗体 0.1ml
Rabbit Anti-Monkey IgG/Gold 胶体金标记的兔抗猴IgG 2ml
Rabbit Anti-horse IgM/Bio 生物素标记的兔抗马IgM 0.1ml
DcR2/CD264/TNFRSF10D 诱捕受体2抗体 0.1ml
RASSF7 RAS家族关联结构域蛋白7抗体 0.2ml
CAPZA2/CapZ alpha 2 F肌动蛋白α2亚基抗体 0.1ml
phospho-ANAPC1(Ser377) 磷酸化细胞周期末期促进复合蛋白APC1抗体 0.1ml