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反应五要素:
大豆特定基因序列(Lectin)核酸检测试剂盒方法参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。
使用及效果:
将压碎的一小片重量约在100 mg 左右的植物种子(约1/4 黄豆大小)或直径约为0.5-0.7 cm(或面积相当的其他形状)的植物叶片直接加到新鲜配制的0.1 mL溶液A 中,95℃保温10-15 分钟,加入0.1 mL 溶液B,混匀,直接取上清液(相当于PCR 体积的1/10)作为模板进行PCR。剩余样品可以放4℃保存。
产品名称 | 规格 | 分类 |
大豆特定基因序列(Lectin)核酸检测试剂盒方法 | 48T | PCR检测试剂盒 |
样本采集、存放及运输:
1、样本采集:各类型样本按照常规方法采集;
2、存放:样本在2~8℃条件下保存应不超过72h,-70℃以下可长期保存,但应避免反复冻融(zui多冻融3次);
3、运输:采用泡沫箱加冰密封进行运输。
普通PCR反应流程:
自备物品:
大豆特定基因序列(Lectin)核酸检测试剂盒方法15毫升锥形离心管:用于制备样品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶标板:用于比色的容器
分光光度仪:用于比色分析
酶标仪:用于微量样品比色分析
储存条件:
14℃或-20℃
准备物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀释液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
产品说明书 1份
5-四氮唑分子式:85.07分子量: CH3N5英文名称:5- amino tetrazoliumCAS号:4418-61-5
2,4,5-三氟硝分子式:177.08分子量: C6H2F3NO2英文名称:2,4,5- threeCAS号:2105-61-5
2-氯-6-甲吡分子式:127.57分子量: C6H6ClN英文名称:2- -6- methyl pyridineCAS号:18368-63-3
地肤子皂苷Ic英文名称:Momordin IcCAS号:96990-18-0分子式:764.93906分子量:C41H64O13
5-氯-2-甲氧吡分子式:143.57分子量: C6H6ClNO英文名称:5- chloride -2- aCAS号:13473-01-3
3-乙酰-5-溴吡分子式:200.04分子量: C7H6BrNO英文名称:3- acetyl -5-CAS号:38940-62-4
3,5-二氟三氟分子式:182.09分子量: C7H3F5英文名称:3,5- two f three fCAS号:401-85-4
千层纸素A英文名称:Thousand layer of paper ACAS号:480-11-5分子式:284.263分子量:C16H12O5
3-喹啉分子式:154.17分子量: C10H6N2英文名称:3- - quinolineCAS号:34846-64-5
1-(4-溴)咪唑分子式:223.07分子量: C9H7BrN2英文名称:1 -(4 -溴)咪唑CAS号:10040-96-7
2-氯-4--6,7-二甲氧喹唑啉分子式:239.66分子量: C10H10ClN3O2英文名称:2- -4-, -6, 7- twoCAS号:23680-84-4
Transferrin receptor 转铁蛋白受体抗体 0.1ml
NRH2 死亡结构域蛋白NRH2抗体 0.2ml
SDH/Sorbitol Dehydrogenase 山梨醇脱氢酶抗体 0.1ml
CDKN1B/P27kip1 P27抗体/周期素依赖激酶抑制剂 0.1ml
LAP18/Stathmin 白血病相关蛋白18/癌蛋白18抗体 0.1ml
Phospho-NFKB1(Ser907) 磷酸化细胞核因子p50/k基因结合核因子抗体 0.1ml
SHFM3 SHFM3蛋白抗体 0.2ml
ALR 肝再生增强因子抗体 0.1ml
NEDD1 神经前体细胞表达蛋白1抗体 0.2ml
human C3 补体C3抗体 0.1ml
KCNQ-1 钾离子通道蛋白家族KCNQ1抗体 0.1ml
phospho-NFKB p65(Ser529) 磷酸化细胞核因子抗体 0.1ml