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样本采集、存放及运输:
1、样本采集:各类型样本按照常规方法采集;
2、存放:样本在2~8℃条件下保存应不超过72h,-70℃以下可长期保存,但应避免反复冻融(zui多冻融3次);
3、运输:采用泡沫箱加冰密封进行运输。
普通PCR反应流程:
使用及效果:
将压碎的一小片重量约在100 mg 左右的植物种子(约1/4 黄豆大小)或直径约为0.5-0.7 cm(或面积相当的其他形状)的植物叶片直接加到新鲜配制的0.1 mL溶液A 中,95℃保温10-15 分钟,加入0.1 mL 溶液B,混匀,直接取上清液(相当于PCR 体积的1/10)作为模板进行PCR。剩余样品可以放4℃保存。
产品名称 | 规格 | 分类 |
蟹特定基因序列(Cytb)核酸检测试剂盒方法 | 48T | PCR检测试剂盒 |
自备物品:
15毫升锥形离心管:用于制备样品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶标板:用于比色的容器
分光光度仪:用于比色分析
酶标仪:用于微量样品比色分析
储存条件:
14℃或-20℃
准备物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀释液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
产品说明书 1份
反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。
1-乙酰咪唑分子式:110.11分子量: C5H6N2O英文名称:1- acetylCAS号:2466-76-4
邻二氯分子式:147分子量: C6H4Cl2英文名称:Adjacent twoCAS号:95-50-1
酒石酸锑钾分子式:667.87分子量: C8H10K2O15Sb2英文名称:Antimony potassium antimonyCAS号:28300-74-5
5-硝水醛英文名称:5- nitro groupCAS号:97-51-8分子式:167.12分子量: C7H5NO4
1,3-双(4-甲氧氧)分子式:322.36分子量: C20H18O4英文名称:1,3- bis (4-) benzeneCAS号:13118-91-7
曙红B英文名称:Eosin BCAS号:548-24-3分子式:624.06分子量: C20H6N2O9Br2Na2
二甲酚蓝英文名称:Xylene phenol blueCAS号:125-31-5分子式:410.48分子量: C23H22O5S
2-氯-5-氟硝分子式:175.54分子量: C6H3ClFNO2英文名称:2- chloride -5-CAS号:345-17-5
2-(2-噻吩)吡分子式:161.22分子量: C9H7NS英文名称:2- (2-) pyridineCAS号:3319-99-1
4-二甲吡(DMAP)分子式:122.17分子量: C7H10N2英文名称:4- two (DMAP)CAS号:1122-58-3
4-甲酸分子式:129.16分子量: C6H11NO2英文名称:4- piperidine formic acidCAS号:498-94-2
蟹特定基因序列(Cytb)核酸检测试剂盒方法phospho-MEK5(Ser142) 磷酸化丝裂原活化蛋白激酶激酶5抗体 0.1ml
Integrin alpha E2 整合素alpha E2 抗体 0.1ml
DHPS 脱氧辅合酶蛋白抗体 0.2ml
phospho C-Met/HGFR(Tyr1365) 磷酸化原癌基因c-Met抗体 0.1ml
BS69/Adenovirus 5 E1A binding protein 腺病毒5结合蛋白BS69抗体(骨形态发生蛋白受体相关分子1) 0.2ml
Phospho-Rb(Ser788) 磷酸化视网膜母细胞瘤相关蛋白1抗体 0.1ml
BTBD17 BTB/POZ结构域蛋白17抗体 0.2ml
IL-17B 白介素-17B抗体 0.1ml
SA1/Nuclear protein stromal antigen 1 粘结蛋白SA1抗体 0.2ml
BAFF/CD257 TNF家族B细胞激活因子抗体 0.2ml
PRX/periaxin 轴周蛋白PRX抗体 0.1ml
DOK6 胞浆接头蛋白Dok6抗体 0.2ml