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反应五要素:
猪流行性腹泻病毒(PEDV)核酸检测试剂盒图片参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。
使用及效果:
将压碎的一小片重量约在100 mg 左右的植物种子(约1/4 黄豆大小)或直径约为0.5-0.7 cm(或面积相当的其他形状)的植物叶片直接加到新鲜配制的0.1 mL溶液A 中,95℃保温10-15 分钟,加入0.1 mL 溶液B,混匀,直接取上清液(相当于PCR 体积的1/10)作为模板进行PCR。剩余样品可以放4℃保存。
产品名称 | 规格 | 分类 |
猪流行性腹泻病毒(PEDV)核酸检测试剂盒图片 | 48T | PCR检测试剂盒 |
样本采集、存放及运输:
1、样本采集:各类型样本按照常规方法采集;
2、存放:样本在2~8℃条件下保存应不超过72h,-70℃以下可长期保存,但应避免反复冻融(zui多冻融3次);
3、运输:采用泡沫箱加冰密封进行运输。
普通PCR反应流程:
自备物品:
猪流行性腹泻病毒(PEDV)核酸检测试剂盒图片15毫升锥形离心管:用于制备样品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶标板:用于比色的容器
分光光度仪:用于比色分析
酶标仪:用于微量样品比色分析
储存条件:
14℃或-20℃
准备物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀释液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
产品说明书 1份
氘代-d6分子式:84.15分子量: C6D6英文名称:Deuterium substituted benzene -d6CAS号:1076-43-3
1-溴-3-(五氟磺酰)分子式:283.06分子量: C6H4BrF5S英文名称:1- -3- (five f) benzeneCAS号:672-30-0
3-溴-6-羟-2-甲吡分子式:188.02分子量: C6H6BrNO英文名称:3- -6- hydroxy -2- methyl pyridineCAS号:54923-31-8
1-Boc-4-分子式:311.16分子量: C10H18INO2英文名称:1-Boc-4- iodine piperidineCAS号:301673-14-3
2-二氟甲溴分子式:分子量: C7H5BrF2英文名称:2- two - methyl fluorideCAS号:845866-82-2
亚硝红盐英文名称:Nitroso R saltCAS号:525-05-3分子式:377.26分子量: C10H5NNa2O8S2;ONC1
7-溴-1-羟异喹啉分子式:224.05分子量: C9H6BrNO英文名称:7- -1- hydroxy ISOCAS号:223671-15-6
2,4-二羟甲英文名称:2,4- two hydroxy benzoic acidCAS号:89-86-1分子式:154.12分子量: C7H6O4
对偶氮分子式:197.24分子量: C12H11N3英文名称:P-aminoazobenzeneCAS号:22162
托曲珠利英文名称:ToltrazurilCAS号:69004-03-1分子式:425.38分子量: C18H14F3N3O4S
二并噻吩砜分子式:216.26分子量: C12H8O2S英文名称:Two benzene and thiopheneCAS号:1016-05-3
FSIP1 纤维性鞘结合蛋白1抗体 0.2ml
CYP11A1/P450SCC 细胞色素P450 11A1抗体 0.1ml
BMP11 骨形态发生蛋白11抗体 0.2ml
Donkey Anti-Guinea pig IgG/PE PE标记的驴抗豚鼠IgG 0.1ml
Rabbit Anti-Biotin/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488标记的兔抗生物素抗体IgG 0.1ml
Tubb3/Tubulin beta 3 微管蛋白β3抗体 0.1ml
SM-MHC 心肌肌球蛋白抗体(α-myosin) 0.1ml
LRCH2 富含亮氨酸重复家庭蛋白2抗体 0.2ml
phospho-eIF4G(ser1108) 磷酸化真核翻译起始因子4G抗体 0.1ml
DCUN1D4 DCUN1D4蛋白抗体 0.2ml
phospho-VAV3(Tyr173) 磷酸化鸟嘌呤核苷酸交换因子VAV3抗体 0.1ml
ZHX2/Alpha fetoprotein regulator 1 甲胎蛋白调节蛋白1抗体 0.2ml