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反应五要素:
牛白血病病毒(BLV)核酸检测试剂盒方法参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。
使用及效果:
将压碎的一小片重量约在100 mg 左右的植物种子(约1/4 黄豆大小)或直径约为0.5-0.7 cm(或面积相当的其他形状)的植物叶片直接加到新鲜配制的0.1 mL溶液A 中,95℃保温10-15 分钟,加入0.1 mL 溶液B,混匀,直接取上清液(相当于PCR 体积的1/10)作为模板进行PCR。剩余样品可以放4℃保存。
产品名称 | 规格 | 分类 |
牛白血病病毒(BLV)核酸检测试剂盒方法 | 48T | PCR检测试剂盒 |
样本采集、存放及运输:
1、样本采集:各类型样本按照常规方法采集;
2、存放:样本在2~8℃条件下保存应不超过72h,-70℃以下可长期保存,但应避免反复冻融(zui多冻融3次);
3、运输:采用泡沫箱加冰密封进行运输。
普通PCR反应流程:
自备物品:
牛白血病病毒(BLV)核酸检测试剂盒方法15毫升锥形离心管:用于制备样品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶标板:用于比色的容器
分光光度仪:用于比色分析
酶标仪:用于微量样品比色分析
储存条件:
14℃或-20℃
准备物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀释液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
产品说明书 1份
穿心莲内酯英文名称:AndrographolideCAS号:5508-58-7分子式:350.4492分子量:C20H30O5
2-甲酰咪唑分子式:96.09分子量: C4H4N2O英文名称:2- aCAS号:10111-08-7
2,6-二溴-4-吡甲醛分子式:264.9分子量: C6H3Br2NO英文名称:2,6- dibromo -4- pyridine formaldehydeCAS号:316800-46-1
性蓝41英文名称:Acid blue 41CAS号:2666-17-3分子式:487.46分子量: C23H18N3NaO6S
川芎嗪英文名称:LigustrazineCAS号:1124-11-4分子式:136.19分子量:C8H12N2
(S,S)-2,2'-异亚丙双(4--2-恶唑啉)分子式:334.42分子量: C21H22N2O2英文名称:(S, S) -2,2'- isopropylidenebis (4- phenyl -2- oxazolinyl)CAS号:131457-46-0
十四烷氯吡分子式:311.93分子量: C19H34ClN英文名称:Fourteen alkyl chlorideCAS号:2785-54-8
氯滴滴涕英文名称:DDT chlorideCAS号:3563-45-9分子式:388.9379分子量:C14H8Cl6
乙联分子式:182.26096分子量: C14H14英文名称:Ethyl groupCAS号:40529-66-6
4-羟-4'-硝联分子式:215.21分子量: C12H9NO3英文名称:4- hydroxy -4'- nitro groupCAS号:3916-44-7
性紫17英文名称:Acid violet 17CAS号:4129-84-4分子式:761.92分子量: C41H44N3NaO6S2
RARRES1/TIG1 视黄酸受体应答蛋白1抗体 0.1ml
GHDC GHDC蛋白抗体 0.2ml
phospho-c-Jun(Tyr170) 磷酸化原癌基因c-Jun抗体 0.1ml
NS5ATP9/KIAA0101 丙型肝炎病毒非结构蛋白5A反式激活蛋白9抗体 0.2ml
phospho-Bid(Ser61) 磷酸化BH3结构域凋亡诱导蛋白抗体 0.1ml
phospho-HRH1(Ser398) 磷酸化组胺受体H1抗体 0.1ml
AFAP/AFAP-110 微丝相关蛋白1抗体 0.2ml
Goat Anti-rat IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350标记的羊抗大鼠IgG 0.1ml
phospho-Tau protein(Thr212) 磷酸化微管相关蛋白抗体 0.1ml
PEG10 肝癌高表达基因抗体 0.1ml
MMP-1 基质金属蛋白酶-1抗体 0.1ml
RPL11/GIG34 细胞生长抑制蛋白34 0.2ml