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反应五要素:
羊特定基因序列(Ovine)核酸检测试剂盒方法参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。
使用及效果:
将压碎的一小片重量约在100 mg 左右的植物种子(约1/4 黄豆大小)或直径约为0.5-0.7 cm(或面积相当的其他形状)的植物叶片直接加到新鲜配制的0.1 mL溶液A 中,95℃保温10-15 分钟,加入0.1 mL 溶液B,混匀,直接取上清液(相当于PCR 体积的1/10)作为模板进行PCR。剩余样品可以放4℃保存。
产品名称 | 规格 | 分类 |
羊特定基因序列(Ovine)核酸检测试剂盒方法 | 48T | PCR检测试剂盒 |
样本采集、存放及运输:
1、样本采集:各类型样本按照常规方法采集;
2、存放:样本在2~8℃条件下保存应不超过72h,-70℃以下可长期保存,但应避免反复冻融(zui多冻融3次);
3、运输:采用泡沫箱加冰密封进行运输。
普通PCR反应流程:
自备物品:
羊特定基因序列(Ovine)核酸检测试剂盒方法15毫升锥形离心管:用于制备样品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶标板:用于比色的容器
分光光度仪:用于比色分析
酶标仪:用于微量样品比色分析
储存条件:
14℃或-20℃
准备物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀释液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
产品说明书 1份
氯锰分子式:197.91分子量: MnCI2•4H2O英文名称:Manganese chlorideCAS号:13446-34-9
2-乙酰噻唑分子式:127.16分子量: C5H5NOS英文名称:2- acetyl thiazoleCAS号:24295-03-2
1,2-萘二甲腈分子式:178.19分子量: C12H6N2英文名称:1,2- naphthalene twoCAS号:19291-76-0
过氧羟异丙分子式:152.19分子量: C9H12O2英文名称:Cumene hydroperoxideCAS号:80-15-9
二正辛砜分子式:290.51分子量: C16H34O2S英文名称:Two normalCAS号:7726-20-7
四氮唑兰英文名称:Blue tetrazoliumCAS号:1871-22-3分子式:727.64分子量: C40H32Cl2N8O2
1--3-硝分子式:249.01分子量: C6H4INO2英文名称:1- -3-CAS号:645-00-1
二甲酚橙英文名称:Two xylenol orangeCAS号:1611-35-4分子式:716.62分子量: C31H32N2O13S:C3
2,2'-二硫二吡分子式:220.31分子量: C10H8N2S2英文名称:2,2'- two twoCAS号:82979
硫酸铝分子式:666.43分子量: Al2(SO4)3·18H2O英文名称:Aluminium sulfateCAS号:7784-31-8
(-)-并四咪唑分子式:252.34分子量: C15H12N2S英文名称:(-)-并四咪唑CAS号:950194-37-3
Calpain 2 钙激活的中性蛋白酶2抗体 0.1ml
HIPK3 Fas相互作用蛋白激酶3抗体 0.2ml
CAP57 中性粒细胞杀菌蛋白BP30抗体 0.2ml
Goat Anti-human IgM/AP 碱性磷酸酶(AP)标记的羊抗人IgM 0.1ml
TMEM166 跨膜蛋白166抗体 0.2ml
Plectin 网蛋白抗体 0.2ml
NAIF1 protein 核凋亡诱导因子蛋白1 0.2ml
CDK9/Cyclin T1 周期素依赖性激酶9抗体 0.1ml
FAIM1 FAS凋亡抑制分子1抗体 0.2ml
ATG8/GABARAPL2 G1氨基A型受体相似蛋白2抗体 0.2ml
C17orf97 17号染色体开放阅读框97抗体 0.2ml
PIBF1/C13orf24 孕酮诱导阻断因子1抗体 0.2ml