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反应五要素:
动物源性成分(18S)核酸检测试剂盒图片参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。
使用及效果:
将压碎的一小片重量约在100 mg 左右的植物种子(约1/4 黄豆大小)或直径约为0.5-0.7 cm(或面积相当的其他形状)的植物叶片直接加到新鲜配制的0.1 mL溶液A 中,95℃保温10-15 分钟,加入0.1 mL 溶液B,混匀,直接取上清液(相当于PCR 体积的1/10)作为模板进行PCR。剩余样品可以放4℃保存。
产品名称 | 规格 | 分类 |
动物源性成分(18S)核酸检测试剂盒图片 | 48T | PCR检测试剂盒 |
样本采集、存放及运输:
1、样本采集:各类型样本按照常规方法采集;
2、存放:样本在2~8℃条件下保存应不超过72h,-70℃以下可长期保存,但应避免反复冻融(zui多冻融3次);
3、运输:采用泡沫箱加冰密封进行运输。
普通PCR反应流程:
自备物品:
动物源性成分(18S)核酸检测试剂盒图片15毫升锥形离心管:用于制备样品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶标板:用于比色的容器
分光光度仪:用于比色分析
酶标仪:用于微量样品比色分析
储存条件:
14℃或-20℃
准备物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀释液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
产品说明书 1份
3--4-羟吡水合物分子式:110.11分子量: C5H6N2O英文名称:3- amino -4- hydroxy pyridine hydrateCAS号:6320-39-4
新绿原英文名称:Neochlorogenic acidCAS号:906-33-2分子式:354.31分子量:C16H18O9
1,1-羰二(2-甲咪唑)分子式:190.2分子量: C9H10N4O英文名称:1,1- carbonyl two (2-)CAS号:13551-83-2
羟吴茱萸碱英文名称:HydroxyevodiamineCAS号:1238-43-3分子式:319.35718分子量:C19H17N3O2
甲硅油英文名称:Methyl silicone oilCAS号:分子式:分子量:
伏虫隆英文名称:Volt wormCAS号:83121-18-0分子式:381.1分子量: C14H6CL2F4N2O2
N-七氟丁酰咪唑分子式:264.1分子量: C7H3F7N2O英文名称:N- seven fCAS号:32477-35-3
贝萼皂苷元英文名称:Shell sepal saponinCAS号:6989-24-8分子式:488.7分子量:C30H48O5
(R)-2-(α-甲苄)-5-硝吡分子式:243.27分子量: C13H13N3O2英文名称:(R) -2- (alpha methyl benzyl group) -5-CAS号:64138-65-4
姬姆氏色素英文名称:Ji MuCAS号:51811-82-6分子式:291.8分子量: C14H14ClN3S
铋试剂II英文名称:Bismuth reagent IICAS号:6336-51-2分子式:264.43分子量: C8H5KN2S3
P53 protein(wt-p53) 肿瘤抑制基因P53蛋白抗体(野生型P53) 0.1ml
HN protein 鸡新城疫血凝素-神经氨酸酶抗体 1ml
GABRA3/GABA A Receptor alpha 3 G氨基受体α3抗体 0.2ml
C17orf74 17号染色体开放阅读框74抗体 0.2ml
Visfatin-1(CT) 内脂素/内脏脂肪素(C端抗体) 0.1ml
IQCA1 IQCA1蛋白抗体 0.2ml
RAB21 G蛋白家族RAB21蛋白抗体 0.2ml
KLHL26 Kelch样蛋白26抗体 0.2ml
phospho-p38 MAPK/MAPK14(Thr180/Tyr182) 磷酸化丝裂原活化蛋白激酶p38抗体 0.1ml
M2-PK/PKM2 酸激酶-M2抗体 0.1ml
Anterior Gradient 2 前梯度同源蛋白2抗体 0.1ml
TM4SF3 跨膜蛋白4超家族成员3抗体 0.2ml