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样本采集、存放及运输:
1、转基因植物cry1A基因核酸检测试剂盒方法样本采集:各类型样本按照常规方法采集;
2、存放:样本在2~8℃条件下保存应不超过72h,-70℃以下可长期保存,但应避免反复冻融(zui多冻融3次);
3、运输:采用泡沫箱加冰密封进行运输。
普通PCR反应流程:
使用及效果:
将压碎的一小片重量约在100 mg 左右的植物种子(约1/4 黄豆大小)或直径约为0.5-0.7 cm(或面积相当的其他形状)的植物叶片直接加到新鲜配制的0.1 mL溶液A 中,95℃保温10-15 分钟,加入0.1 mL 溶液B,混匀,直接取上清液(相当于PCR 体积的1/10)作为模板进行PCR。剩余样品可以放4℃保存。
产品名称 | 规格 | 分类 |
转基因植物cry1A基因核酸检测试剂盒方法 | 48T | PCR检测试剂盒 |
自备物品:
15毫升锥形离心管:用于制备样品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶标板:用于比色的容器
分光光度仪:用于比色分析
酶标仪:用于微量样品比色分析
储存条件:
14℃或-20℃
准备物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀释液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
产品说明书 1份
反应五要素:
转基因植物cry1A基因核酸检测试剂盒方法参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。
偶氮胂II英文名称:Arsenazo IICAS号:3861-75-4分子式:分子量: C32H20As2N4Na4O2
牛蒡苷英文名称:Niu BangganCAS号:20362-31-6分子式:534.55分子量:C27H34O11
5--2,4-二氟三氟甲分子式:197.11分子量: C7H4F5N英文名称:5- amino -2,4- two f three fCAS号:261944-56-3
溴甲酚紫英文名称:Bromocresol purpleCAS号:115-40-2分子式:540.24分子量: C21H16Br2O5S
磺胺醋酰分子式:214.24分子量: C8H10N2O3S英文名称:SulphacetamideCAS号:144-80-9
溶剂红48英文名称:Solvent Red 48CAS号:13473-26-2分子式:785.67分子量: C20H4Br4Cl4O5
3-羟-2,4,6-*(HTBA)英文名称:3- hydroxy -2,4,6- three iodo benzoic acid (HTBA)CAS号:53279-72-4分子式:515.81分子量: C7H3I3O3
间溴联分子式:233.1分子量: C12H9Br;C6H5C6H4Br英文名称:Inter - BrCAS号:2113-57-7
2-氟-4-氯甲分子式:144.57分子量: C7H6ClF英文名称:2- -4- chlorideCAS号:452-75-5
4-氨甲分子式:187.11分子量: C6H16Cl2N2英文名称:4- ammonia methyl piperidineCAS号:7144-05-0
硫钴分子式:123.06分子量: CoS2英文名称:Cobalt sulfideCAS号:12013-10-4
转基因植物cry1A基因核酸检测试剂盒方法Phospho-Btk(Ser180) 磷酸化蛋白酪氨酸激酶ATK抗体 0.1ml
KCNK9/KCNK3 酸敏感钾离子通道蛋白3抗体 0.1ml
C1orf144 1号染色体开放阅读框144抗体 0.2ml
CKAP4 细胞骨架相关蛋白4抗体 0.2ml
HHV8/ORF50 人类疱疹病毒8抗体 0.2ml
Rabbit Anti-rat IgG/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5标记的兔抗大鼠IgG 0.1ml
Goat Anti-rabbit IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350标记的羊抗兔IgG 0.1ml
CD54/ICAM-1 细胞间粘附分子-1抗体 0.1ml
FBXL11 FBXL11蛋白抗体 0.2ml
DNAH10 轴丝动力蛋白10抗体 0.2ml
GCMA/GCM1 绒毛膜特异性转录因子GCMa抗体 0.2ml
C5ORF4 5号染色体开放阅读框4抗体 0.2ml